R Ekosistem

1. Donmuş tüpü sıvı nitrojenden çıkarın ve hemen 37°C su banyosuna hafifçe çalkalayın. Sıvı eridikten sonra (yaklaşık 1-1,5 dakika) biraz alkol alın ve ultra temiz çalışma masasının üzerine koyun.

2. Hücre süspansiyonunu 10 ml ortam içeren 15 ml'lik bir santrifüj tüpüne alın (donmuş tüpü ortamla yıkayın ve duvara yapışmış tüm hücreleri yıkayın) ve 1000°C'de 5 dakika santrifüjleyin.

3. Süpernatan ters çevrildi ve hücreleri süspansiyon haline getirmek için 1 ml ortam eklendi. 10 ml ortam içeren 10 cm'lik bir tabağa tütsüleyin ve hücreleri tabakta eşit şekilde dağıtmak için hafifçe sola ve sağa sallayın.

4. Hücre tipini ve tarihini, insan adını vb. işaretleyin, CO2 inkübatörüne koyun, hücreleri yapıştırın ve ortamı değiştirin.

5. Ortam her 3 günde bir değiştirildi.

P assage

1. Bitkiler, %80-90 kaplamaya ulaşacak şekilde pasajlanmıştır.

2. Orijinal ortam hakkında .

3. Uygun tripsin ekleyin (sadece hücreleri kaplayın) ve 1-2 dakika sindirin .

4. Sindirim, eşit hacimde serum içeren ortam eklenerek sonlandırıldı. .

5. Hücreleri bir pipet tabancasıyla üfleyin ve hepsini askıda bırakın.

6. Hücreler, 15 ml'lik bir santrifüj tüpüne aspire edildi ve 1000°C'de 5 dakika santrifüjlendi.

7. Süpernatantı dökün ve tüm hücreleri havaya uçurmak için 1-2 ml ortam ekleyin.

8. Hücreler, hücre türlerine bağlı olarak birkaç kültür kabına geçirildi. Genel olarak kanser hücreleri 5 hücreye bölünür ve üç normal hücre bulaşır. Yetiştirmeye devam edin.

Hücreleri sindirmek ve santrifüj etmek serbesttir (ibid. yukarıda).

Hücreleri eşleşen donmuş saklama solüsyonuyla süspanse edin, sterilize edilmiş bir dondurucu tüpüne bölün, birkaç dakika dinlendirin ve hücre tipini ve donmuş saklama tarihini belirtin.4°C 30dk, -20°C 30dk, -80°gece ve sonra sıvı nitrojen perfüzyonunda saklanır.

Kriyoprezervasyon solüsyonunun hazırlanması: %70 orta %20 FBS %10 DMSO. DMSO yavaş yavaş eklenmeli ve sürekli çalkalanmalıdır.