ELISA belirleme deneylerinde yardımcı malzeme olarak bir Enzim plaka belirleyici bir rol oynar ve nihai deney sonuçlarını doğrudan etkiler. kalitesi enzim plakası esas olarak protein adsorpsiyonuna duyarlılığına, plakalar ve delikler arasındaki protein adsorpsiyon kapasitesindeki farka ve satın alınan ürünlerin partileri arasındaki farka bağlıdır. enzim plakası . Bu nedenle, bir enzim plakası Yüksek protein adsorpsiyon hassasiyetine sahip ürün, protein adsorpsiyon kapasitesi delikleri arasındaki küçük fark ve partiler arasındaki küçük fark, deneyi yapan kişinin güvenilir ve istikrarlı deneysel sonuçlar elde etmesinin garantisidir.

enzim plakası sınıflandırma: farklı sınıflandırma standartlarına göre, plaka var farklı sınıflandırmalar

1: Delik sayısına göre 96 delik, 48 delik vb. enzim plakası esas olarak mikroplaka okuyucu ile kullanılır, plaka piyasadaki metre en fazla 96 deliktir, yani mikroplaka 96 deliktir.

2: Farklı diplere göre, düz dipli, U tabanlı, V tabanlı vb.

Düz tabanın kırılma indeksi düşüktür, bu da mikroplakada tespit için uygundur;

T U mikroplaka kırılma indeksi yüksektir, numune alma, numune alma ve karıştırma için uygundur ve karşılık gelen bir bağışıklık reaksiyonu olup olmadığını belirlemek için renk değişimini mikroplaka üzerine yerleştirmeden doğrudan gözlemleyebilir.

V bazının mikroplakası, numuneyi doğru bir şekilde emebilir.

3: Mikroplaka, protein ve diğer moleküllerin farklı bağlama yeteneklerine göre, yüksek bağlama kuvveti, orta bağlama kuvveti ve aminasyon olarak ayrılır.

(1) Yüksek bağlama kuvveti

Bu mikroplakanın yüzeyinden sonra, protein bağlama kabiliyeti 300~400ng IgG/cm2'ye kadar büyük ölçüde artar ve ana bağlı proteinin moleküler ağırlığı > 10 kD'dir. Bu mikroplaka sınıfının kullanılması duyarlılığı artırabilir ve kaplanmış proteinin konsantrasyonunu ve miktarını nispeten azaltabilir, bu da spesifik olmayan reaksiyonların üretilmesini kolaylaştırır. Antijen veya antikorla kaplandıktan sonra iyonik olmayan deterjan, bağlanmamış protein bölgesini etkili bir şekilde kapatamaz ve protein, sızdırmazlık maddesi olarak kullanılmalıdır.

(2) Orta bağlama kuvveti

Bu tür mikroplaka plakalar, yüzeydeki hidrofobik bağlar yoluyla proteine ​​pasif olarak bağlanır ve 200 ila 300 ng IgG / cm2 protein bağlama kapasitesine sahip, moleküler ağırlığı > 20 kD olan makromoleküler proteinler için katı faz taşıyıcıları olarak uygundur. Yalnızca makromoleküllere bağlanma özelliklerinden dolayı, spesifik olmayan çapraz reaktivite potansiyelini azaltmak için saflaştırılmamış antikorlar veya antijenler olarak katı fazlı taşıyıcılar için uygundur. Plaka, bir sızdırmazlık solüsyonu olarak inert bir protein veya iyonik olmayan bir deterjan olabilir.

(3) aminasyon

Bir yüzey modifikasyonundan sonra bu mikroplaka, hidrofobik bağı bir hidrofilik bağ ile değiştirilen pozitif yüklü bir amino grubuna sahiptir. Bu mikroplaka sınıfı, küçük moleküllü proteinler için katı fazlı bir taşıyıcı olarak uygundur. Uygun bir tampon ve pH kullanarak yüzey, iyonik bağlar yoluyla negatif yüklü küçük moleküllere bağlanır. Yüzeyinin hidrofilik özelliği ve diğer çapraz bağlayıcılar tarafından kovalent olarak bağlanabilmesi nedeniyle Triton-100, Tween 20 vb. dekontaminasyon ajanlarında çözünen protein moleküllerini sabitlemek için kullanılabilir. Bu plakanın kusuru azaltılmış hidrofobiklik nedeniyle; ayrıca yüzeyin etkili bir şekilde kapatılması gerekir. Hidrofilik ve kovalent yüzey özelliklerinden dolayı kullanılan kapatma solüsyonu, reaktif olmayan amino grubundaki herhangi bir fonksiyonel grup ve seçilen çapraz bağlayıcı ile etkileşime girebilmelidir.

4. Renge göre şeffaf, siyah ve beyaz olarak ayrılabilir.

Şeffaf, en genel enzime bağlı bağışıklama deneyleri için en yaygın olarak kullanılandır. Relcontrast'ta şeffaf mikroplakanın yanı sıra, genellikle siyah ve beyaz olmak üzere parlak algılama için opak mikroplakalar da vardır. Siyah mikroplakanın kendisi ışık absorpsiyonuna sahiptir, bu nedenle sinyali beyaz mikroplakadan çok daha düşüktür, bu nedenle genellikle floresan algılama gibi güçlü ışığı algılamak için kullanılır. Beyaz mikroplaka, genellikle genel kemilüminesans için kullanılan zayıf ışık tespiti için kullanılır. Ek olarak, siyah mikroplaka, spesifik olmayan reaksiyonlar sorununu da zayıflatabilir. Aynı zamanda, kemilüminesans reaksiyonundan yayılan ışık izotropik olduğundan, genel mikroplaka ile parlak algılama olamayacağına dikkat etmek önemlidir, eğer şeffaf bir mikroplaka ile ışık sadece dikey yönden yayılmazsa, ama aynı zamanda yatay yönden, delik ve delik duvarı arasındaki boşluktan kolayca ışık yapın, bu da deliğin ışık emme değerinin ışığın bitişik delikten yayılan ışıktan etkilenmesine neden olur.

İyi bir mikroplaka, iyi adsorpsiyon performansına, düşük boş değere, delik tabanının yüksek şeffaflığına ve plakalar arasında ve aynı plakanın delikleri arasında benzer performansa sahip olmalıdır. Hammaddelerdeki farklılık ve üretim sürecindeki farklılık nedeniyle, çeşitli ürünlerin kalitesi çok farklıdır, bu nedenle, her mikroplaka partisinin performansı kullanımdan önce önceden kontrol edilmelidir. Yaygın olarak kullanılan inceleme yöntemleri, ELISA plaka hazneleri ile kaplanmış belirli bir konsantrasyondaki insan IgG'sidir (genellikle 10 ng/ml), yıkamadan sonra, her hazneye uygun bir enzim etiketli anti-insan IgG antikoru seyreltmesi eklenmesi, ısıyla korumadan sonra yıkama, Substrat rengi ekleyerek, enzim reaksiyonunu durdurun ve sırasıyla her bir kuyucukta çözeltinin absorbansını ölçün. Reaksiyon koşulları, her kuyucuğun okuması yaklaşık 0.8'lik bir absorbansta tutulacak şekilde kontrol edildi. Toplam okumaların ortalaması hesaplandı. Tüm bireysel okumaların ortalaması ile tüm okumaların ortalaması arasındaki fark %10'dan az olmalıdır. Aşağıdaki üç mikroplaka örnek olarak A, B ve C'dir.

Doğrudan yöntem: İnsan IgG'sinin mikroplaka yüzeyinde adsorpsiyonunu saptamak için

Çift antikorlu sandviç yöntemi: anti-insan antikoru için pozitif serum antijeni

Yukarıdaki şekilden görülebileceği gibi, bu üç tip biyoenzim plakasında, A sınıfı mikroplaka daha iyi bir protein adsorpsiyon etkisine sahiptir, ancak aynı zamanda daha güvenilir deneysel veriler sağlayabilen protein adsorpsiyonunun hassasiyetini de geliştirir. Ayrıca parti farkının plakasını da sorabilirsiniz. Belirli bir plakanın parti farkı aşağıdadır. Parti içi fark veri tablosundan görülebileceği gibi, mikroplaka partiler arası iyi bir kararlılığa sahiptir ve parti içi varyasyon katsayısı (CV) farkı, parti içi varyasyon katsayısından önemli ölçüde daha düşük olan %5,0 civarındadır. klinik immün reaksiyon için kalite kontrol standardında %10.0'ın altında. Bu nedenle ELISA deneyleri için de uygundur.