Masaüstü düşük hızlı dondurma santrifüjü ile sitoplazmik ve nükleer proteinlerin ekstraksiyonu için santrifüjlemenin ayrıntılı adımları

tarafından gönderildi yönetici | 23 Mar

Masaüstü düşük hızlı dondurma santrifüjü, laboratuvarda biyolojik makromoleküllerin, tortuların vb. Santrifüj tüpü sert cam, polietilen sert plastik ve paslanmaz çelik borudan yapılmıştır. Santrifüj, bir tahrik motoru, bir zamanlayıcı, bir regülatör (hız göstergesi) ve bir soğutma sistemi (ayarlanabilir sıcaklık aralığı - 20~ 40 ℃) ile donatılmıştır; santrifüj malzemesinin ihtiyaçlarına göre.

Masaüstü düşük hızlı dondurma santrifüjü ile sitoplazmik ve nükleer proteinlerin ekstraksiyonu için santrifüjlemenin ayrıntılı adımları:

1. Hücre büyüme durumunu belirleyin. Hücre büyüme durumu %80 veya daha iyi olmalıdır:

2. 1500r/dk'da 5 dakika santrifüjleyin

3. Süpernatantı atın, hücreleri eşit hacimde soğuk PBS ile yıkayın ve 2. adımdaki gibi 3 kez tekrarlayın

4. Tahmini çökelme miktarına göre, hücrelerin hafifçe süspansiyon haline gelmesini sağlamak ve mümkün olduğunca köpük oluşmasını önlemek için hücre parçacıklarına izotonik sis-tampon hacminin 5 katı kadar ekleyin.

5. Askıdaki hücrelere lizis tamponu ekleyin ve hücrelerin genişlemesine izin vermek için 15 dakika boyunca buzun üzerine koyun; bu, mikroskopla kontrol edilebilir.

6. Hücre deneyindeki genişletilmiş hücreler için, nihai konsantrasyonun %0,3'e ulaşması için %10 IGEPALCA-630 ekleyin, iyice karıştırın ve yavaşça ekleyin

7. Hemen santrifüjleyin (büyük miktarlar için 30 saniye boyunca 5500 dev/dak'da 1,5 ml EP tüpü kullanın; büyük miktarlar için 2 dakika boyunca 50 ml tüpü 5500 dev/dak hızında kullanın)

8. Süpernatanı (sitoplazmik protein) yeni bir dondurma tüpüne aktarın

9. Hücreleri, izotonik tamponda süspansiyon halindeki parçacıkların hacminin 5 katı olacak şekilde süspanse edin ve iyice karıştırın

10. Hücre süspansiyonunu 1500r/dak'da 5 dakika santrifüjleyin ve süpernatantı çıkarın

11. Ekstraksiyon tampon hacminin 2/3 katı olan partikülleri askıya alın

12. Tüpü titreşimli karıştırıcıya yerleştirin, çalkalayın ve 700 dev/dak'da 15 dakika ve ardından 1400 dev/dak'da 15 dakika karıştırın. Tüm süreç köpüğü önlemek için dikkatli olmalıdır

13. 9400 dev/dak'da 15 dakika santrifüjleyin, düşük sıcaklıkta santrifüjlemeden sonra süpernatantı yeni bir donmuş santrifüj tüpüne aktarın

14.Birkaç parçaya bölün ve sıvı nitrojen ile dondurun ve saklayın (uzun süreli depolama - 80 ℃, kısa süreli depolama - 20 ℃ olmalıdır)