Deneyden önce, tüm reaktifler ve numuneler oda sıcaklığında dengelenmelidir; yeniden eritmeden sonra numuneler tekrar santrifüjlenmeli ve test için süpernatant alınmalıdır; reaktifler veya numune hazırlama için karıştırın ve köpürmeyi önleyin; Tekrarlanan testler için kalibrasyon ve numuneler önerilir.

1. Ekleyin: standart çalışma solüsyonunu sırayla ilk iki kuyucuğa ekleyin ve çalışma solüsyonunun her konsantrasyonu için iki delik ekleyin, 100 mikro Her kuyunun L'si. Test edilecek numuneler diğer kuyucuklara eklenir, 100 mikro Kuyu başına L (test aralığının üzerindeki numune konsantrasyonu için, standart ve numune dilüsyonları ile seyreltilmiş numune). Mikroplaka filmle kaplandı ve 37°C'de inkübe edildi. ℃ 90 dakika İpucu: Numuneyi mikroplakanın dibine eklerken, kabarcık oluşumunu önlemek için delik duvarına dokunmamaya çalışın, hafifçe sallayın ve karıştırın. Uzatma süresi 10 dakika içinde kontrol edilmelidir.

2. Biyotinlenmiş antikor/antijen: sıvıyı atın ve yıkamadan çalkalayarak kurutun. 100 uL biyotinlenmiş antikor/antijen çalışma solüsyonu hemen her kuyucuğa eklendi, karıştırıldı, mikroplaka artı film kaplı ve 37°C'de 1 saat inkübe edildi.

3. Yıkama: delikteki sıvıyı çalkalayın, her kuyucuğa 350 mikro L yıkama sıvısı ekleyin, 1-2 dakika bekletin, mikroplakadaki sıvıyı emdirin veya çalkalayın ve kalın emici kağıt üzerinde hafifçe vurarak kurutun. Bu yıkama plakası adımını 3 kez tekrarlayın. İpucu: Çamaşır makinesi burada ve diğer yıkama adımlarında kullanılabilir. Yıkamanın her adımı deney için önemlidir.

4. HRP enzim konjugatı: 100 mikro Kuyu başına L enzim eşlenik çalışma solüsyonu, karıştırıldı, filmle kaplandı ve 37°C'de inkübe edildi ℃ 30 dakika için.

5. Yıkama: Kuyudaki sıvıyı atın ve plakayı 3. adımdaki gibi 5 kez yıkayın.

6. Substrat: Her kuyucuğa 90 μ L substrat solüsyonu (TMB) ekleyin, iyice karıştırın, film kaplama ekleyin ve 37°C'de yaklaşık 15 dakika inkübe edin. Not: Kuluçka süresi, gerçek renk geliştirme durumuna göre kısaltılmalı veya uzatılmalıdır, ancak 30 dakikayı geçmemelidir. Standart delikte net bir eğim göründüğünde sonlandırılabilir.

7. Sonlandırma: 50 ekleyin μ Reaksiyonu sonlandırmak için her kuyucuğa L sonlandırma solüsyonu. Not: Sonlandırma solüsyonunun ekleme sırası, substrat solüsyonununkiyle aynı olmalıdır.

8. Okuyun: Bir mikroplaka okuyucu ile her kuyucuğun optik yoğunluğunu (OD) hemen 450 nm'de ölçün. Test prosedürünü ayarlamak için mikroplaka okuyucu önceden açılmalıdır.

9. Deneyden sonra kullanılmayan reaktifi raf ömrü kadar belirtilen saklama sıcaklığında tekrar buzdolabına koyun.